Главная Справочник Собаки Книги о собаках Традиционные и нетрадиционные методы лечения собак Современные подходы к лечению, профилактике и диагностике вирусных заболеваний у собак

Современные подходы к лечению, профилактике и диагностике вирусных заболеваний у собак

СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ЛЕЧЕНИЮ, ПРОФИЛАКТИКЕ И ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

ПРОТИВОВИРУСНОЕ ДЕЙСТВИЕ ФОСПРЕНИЛА: ПРИНЦИПЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

С.В.ОЖЕРЕЛКОВ
Действующим началом препарата фоспренил, который обладает широким спектром биологической активности (гепатопротекторной, ранозаживляющей, антидиабетической и др.), являются фосфаты полипренолов (ФП). Одной из наиболее привлекательных и актуальных для практической ветеринарии (и медицины) сторон является противовирусная активность фоспренила. Другим перспективным для лечебной практики направлением является иммуномодулирующая активность фоспренила, применение ФП в качестве адъюванта для противовирусных вакцин. Механизмы противовирусного действия фоспренила окончательно не изучены. Это объясняется полифункциональной активностью и комплексным действием фоспренила при вирусной инфекции, как на организм в целом (включая клетки иммунной системы), так и на клеточном уровне, включая: 1) клетки иммунной системы, 2) клетки-мишени для вирусов. В настоящем разделе мы хотели бы обратить внимание специалистов на целесообразность использования фоспренила в качестве профилактического и лечебного противовирусного средства, и обобщить имеющиеся данные, касающиеся механизмов его действия как иммуномодулятора, так и препарата, обладающего, по-видимому, прямым противовирусным эффектом.

ДЕЙСТВИЕ ФОСПРЕНИЛА КАК ИММУОКОРРЕКТОРА ВТОРИЧНЫХ ИММУНОДЕФИЦИТОВ

К числу ведущих факторов, вызывающих в организме животных вторичный иммунодефицит (невозможность или снижение способности иммунной системы адекватно отвечать на инфицирование организма патогенами различной природы, в том числе и вирусами или, например, сформировать вакцинальный иммунитет), относится стресс. Известно, что при современной жизни, животные постоянно подвергаются воздействию множества стресс-факторов (стрессоров), как физических (климатические условия, изменения экологической обстановки, загрязнение окружающей среды, антигенная нагрузка, состав воды и пищи, транспортировка, тренировочные нагрузки, травмы и др.), так и психогенных (смена или потеря хозяина, скученность при содержании на ограниченной площади и др.).
В многочисленных клинических и экспериментальных исследованиях, начиная с 60-х годов и кончая современными было показано, что стресс вызывает в организме человека и животных иммуносупрессию: 1) снижает количество циркулирующих Т- и В-лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, иммуноглобулинов; 2) подавляет первичный и вторичный иммунный ответ к различным антигенам; значительно снижает абсолютное число и фагоцитирующую активность макрофагов селезенки; 3) снижает цитотоксическую активность естественных киллеров и макрофагов; 4) подавляет способность клеток продуцировать а-, р-и у-интерферон и, напротив, способствует увеличению продукции некоторых цитокинов (ИЛ-1р, ФНО-ос). На фоне стресс-индуцированного иммунодефицита в организме животных наблюдаются возникновение и отягощение течения целого ряда вирусных инфекций, активация латентных вирусных инфекций, а
также подавление развития специфического иммунного ответа при вакцинации. При этом сама по себе перенесенная или латентная вирусная инфекция является фактором, вызывающим формирование иммунодефицитных состояний, на фоне которых могут развиваться осложнения в виде секундарных и оппортунистических инфекций, ослабленная реакция на вакцинацию. Вторичный иммунодефицит могут вызывать многие вирусы, в т.ч. вирусы, играющие важную роль в инфекционной патологии животных (парвовирусы, герпесвирусы, ретровирусы, реовирусы и др.)
Действие вышеперечисленных факторов объясняет пониженную сопротивляемость животных к вирусным инфекциям и снижение эффективности вакцинации. Все это обосновывает целесообразность разработки и внедрения высокоэффективных иммунокорректоров. Несмотря на то, что в современной клинической и экспериментальной практике широко используются десятки природных и синтетических иммуномодуляторов (олексин, ридостин, иммунофан, полиоксидоний, неовир, лейкинферон, циклоферон, ронколейкин – рекомбинантный ИЛ-2, беталейкин – рекомбинантный ИЛ-1β, гликопин, вилон, тимоген. и др.), их применение ограничивается рядом факторов, и лишь крайне немногие из них обладают прямым противовирусным эффектом.
В наших экспериментальных исследованиях убедительно показано, что фоспренил, зарегистрированный в РФ как противовирусный препарат (А.В.Санин и соавт., 1991), является эффективным иммунокорректором вторичных иммунодефицитов, индуцированных различными внешними факторами: вирусной инфекцией, стрессом, радиацией. Например, однократное внутримышечное введение фоспренила мышам в дозе 5 мкг за короткий срок полностью восстанавливает специализированные функции антителообразующих В-клеток (АОК), значительно сниженные вследствие вирус- или стресс-индуцированного иммунодефицита (Данилов Л.Л. и соавт.,1999).
В экспериментах на мышах, подвергавшихся радиационному воздействию в дозе 900 рад, выявлена эффективность применения фоспренила в качестве корректора функций стволовых клеток костного мозга (СККМ). У облученных контрольных животных отмечали полное подавление пролиферации СККМ, тогда как у облученных мышей, которым однократно перорально или внутримышечно вводили ФП в дозе 0,4 мкг регистрировали значительное увеличение способности СККМ к пролиферации.
Исходя из накопленных фактов, можно предположить, что механизм иммунокорригирующей способности фоспренила, по-видимому, состоит в следующем. Эндогенные фосфаты полипренолов участвуют в биосинтезе N-гликановых цепей гликопротеинов, к которым относятся, в частности, все виды иммуноглобулинов (IgA, IgG, IgM), γ- и β- интерфероны, поверхностные антигены и практически все рецепторы клеточной поверхности. Вполне вероятно, что при вторичных иммунодефицитах в клетках наблюдается недостаток эндогенных фосфатов полипренолов, поэтому введение в организм дополнительных ФП нормализует физиологию и функции иммунокомпетентных клеток, в том числе АОК. Одним из возможных механизмов устранения с помощью фоспренила клеточного дисбаланса, наблюдаемого при вторичном иммунодефиците, по-видимому, является выброс в кровь СККМ при инъекциях животным фоспренила. С другой стороны, известно, что ФП являются интегральным компонентами клеточных мембран и влияют на многие их свойства (текучесть, проницаемость и т.д.). Логично предположить, что введение в организм экзогенных ФП способствует восстановлению как структур клеток (нарушенных в результате цитотоксического действия гормонов стресса и глюкокортикоидов или при других неблагоприятных воздействиях, например, при вирусных инфекциях), так и их способности к пролиферации.
Таким образом, фоспренил может быть использован в ветеринарной практике в качестве высокоэффективного
антистрессорного препарата и иммунокорректора. Важно отметить, что фоспренил имеет целый ряд преимуществ по сравнению с другими препаратами: 1) не является ксенобиотиком; 2) не является антигеном; 3)действует на организм комплексно: не стимулируя избирательно какое-либо одно из звеньев гуморального или клеточного иммунитета, а способствует нормальному функционированию клеток иммунной системы организма в целом; 4) фоспренил может использоваться в качестве неспецифического профилактического противовирусного средства и при этом, в отличие от специфических сывороток и иммуноглобулинов, не имеет ограничений во времени применения. Здесь уместно подчеркнуть, что использование сывороток и иммуноглобулинов высокоэффективно лишь на ранних стадиях инфекционного вирусного процесса. Сыворотки эффективно работают против вируса тогда, когда вирус находится в крови. Это продолжается примерно 5-7 дней после начала заболевания. Когда вирус "уходит" в ткани, эффективность применения сывороток резко падает. На поздних сроках применение таких препаратов может вызвать развитие ряда иммунопатологических реакций и осложнить течение инфекции. Например, при экспериментальном клещевом энцефалите было установлено, что антитела (в определенных титрах) могут индуцировать повреждающее действие макрофагов во второй половине инкубационного периода.
Фоспренил, кроме того, зарекомендовал себя как высокоэффективный адъювант. Например, в опытах с инактивированной коммерческой вакциной против клещевого энцефалита автором было показано, что вакцина, непосредственно разведенная не обычным растворителем, а фоспренилом, увеличивает свою специфическую активность в 8-10 раз. Использование фоспренила как адъюванта противовирусных вакцин значительно повысит эффективность вакцинации, особенно в тех случаях, когда у животного выявлен или подозревается вторичный иммунодефицит. Доказано, что фоспренил значительно стимулирует формирование и напряженность вакцинального иммунитета у собак при совместном его введении с антирабической вакциной (Аржаев А.М. и соавт., 1999).

ФОСПРЕНИЛ - НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ИММУНОМОДУЛЯТОР ПРИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ

В экспериментальных исследованиях, проведенных А.В.Саниным, А.Н.Наровлянским, О.Ю.Сосновской, А.В.Прониным, А.В.Деевой и др. в опытах in vivo и in vitro удалось убедительно доказать, что фоспренил обладает широким спектром биологической активности, в частности влияет на функционирование иммунной системы, гемопоэтической и системы естественной резистентности (A.V.Sanin, e.a.,1992; A.V.Sanin, e.a.,1993; L.L.Danilov e.a., 1997). Одним из механизмов стимуляции фоспренилом системы естественной резистентности организма является индукция выработки эндогенных интерферонов (ИФН). Например, в опытах на мышах линии СВА показано, что при внутрибрюшинном однократном введении фоспренила в дозах 40 и 200 мкг/мышь регистрировалась индукция ИФН в сыворотке крови через 2 часа, причем уровень ИФН сохранялся повышенным до 72 часов после введения препарата, достигая 256 ЕД , в то время как у контрольных животных - 0 ЕД. В опытах in vitro было исследовано влияние ФП на действие стандартных индукторов ИФН: ридостина, неовира - камедона (индукторов ИФН-ос и ИФН-р), стафиллококкового энтеротоксина А (СЭА), определяющего способость клеток к синтезу ИФН-у. Эксперименты на мышах показали, что предварительное введение фоспренила в дозе 5 мкг/ мышь приводит к усилению активности применяемых впоследствии ридостина и неовира. В опытах на клетках мышиных фибробластов L929 было установлено, что фоспренил увеличивает неовир- и ридостин- индуцированную продукцию ИФН-а/р. Кроме того, показано, что фоспренил модулирует активность иммукомпетентных клеток тимуса, селезенки, стимулируя ИФН-ответ на стандартные индукторы ИФН и способствуя повышению ИФН-активирующей способности сыворотки и плазмы крови.

Показано, что фоспренил способен стимулировать в организме животных продукцию некоторых цитокинов, играющих ключевую роль в развитии гуморального и клеточного иммунного ответа при вирусной инфекции. Так, на мышах линии С57Вl/6 установлено, что фоспренил, введенный животным однократно в дозах 1 или 4 мкг, внутримышечно или перорально, индуцирует продукцию ФНО до уровня 30-50 ЕД. При внутримышечном введении фоспренила мышам линии BALB/c отмечали 3-6-кратную стимуляцию ИЛ-1 через 24 часа. Пероральное введение препарата животным приводило к стимуляции ИЛ-1 в 1,6 раза по сравнению с контролем через 7 суток. Все эти данные были получены на незараженных вирусами животных. Возникает вопрос: как реализуется механизм противовирусного действия фоспренила в организме инфицированного вирусом животного? Для ответа на этот вопрос мы провели серию опытов, моделируя у мышей инфекцию, вызываемую вирусом клещевого энцефалита. Нам удалось установить,что, при одновременном введении в организм животных вируса и препарата, выживает до 60% мышей, тогда как зараженные вирусом не обработанные фоспренилом мыши заболевают и гибнут в 100 % случаев через 7-9 суток после заражения вирусом. Мы провели обследование сывороток крови животных, которым вводили фоспренил и вирус, а также зараженных мышей, которым фоспренил не вводили. С помощью иммуноферментного метода определяли уровни цитокинов ИЛ-6, ФНО-α, ИФН-γ и ИЛ-2 на 1-е, 2-е, 3-и, 4-е, 5-е, 6-е и 7-е сутки после заражения, т.е. в течение всего инкубационного периода до начала проявления клинических признаков клещевого энцефалита (парезов и параличей с последующей гибелью). В те же сроки определяли уровни цитокинов у мышей, которым вводили только препарат без вируса. Результаты исследования показали, что в сыворотках крови животных, которым вводили вирус и фоспренил, уровень ИЛ-6 значительно повышался уже на 1-е сутки, а стимуляция ФНО-α, ИФН-γ регистрировалась на 3-и сутки. Такую раннюю стимуляцию не наблюдали ни у животных, которым вводили только препарат, ни у мышей, которых заражали вирусом. Полученные данные, на наш взгляд, свидетельствуют о том, что при попадании в организм патогена (в данном случае вируса) фоспренил стимулирует моноциты и макрофаги, которые продуцируют цитокины, стимулирующие дифференцировку (ИЛ-6) и пролиферацию (ФНО-α), В-клеток и секрецию антител к вирусу. Кроме того ФНО-α обладает цитотоксичностью по отношению к вирусинфицированным клеткам. Аналогичной способностью обладает и ИФН-γ.Так в общих чертах выглядит механизм антивирусной активности фоспренила, реализующийся посредством его иммуномодулирующей активности.
Полученные нами данные на модели инфекции, вызываемой вирусом клещевого энцефалита, согласуются с результатами Iida J. et.al. (1990), которые показали, что химически синтезированный полипренол – дегидрогептапренол (ДГП) в дозе 200 мкг, введенный интраназально дважды – за 3 дня и за 1 день до заражения, значительно повышает устойчивость мышей к инфекции, вызываемой вирусом Сендай. При этом у животных, обработанных ДГП и зараженных вирусом, отмечали значительное повышение продукции интерферона и ФНО по сравнению с мышами, которым вводили только препарат или только вирус.

Таким образом, фоспренил проявляет себя как один из оптимальных для ветеринарной практики иммуномодуляторов, так как, введенный в организм, в котором отсутствует патоген (например, вирус), этот препарат, по-видимому, не вызывает гиперстимуляции иммунной системы, которая, как известно, может приводить к развитию целого ряда патологических реакций и повредить организму. В случае угрозы развития вирусной инфекции применение фоспренил вызывает оптимальную "раннюю" стимуляцию гуморального и клеточного иммунитета, что и позволяет организму вовремя защититься от инфекции. Кроме того, препарат в силу своей химической природы обладает способностью восстановить структуру и функции клеток иммунной системы (и не только клеток иммунной системы), поврежденных в результате вирусной инфекции. Хорошо известно, что многие вирусы активно размножаются в иммунокомпетентных клетках и могут длительно сохраняться в них (персистировать). Некоторые вирусные гены, имея сходство с генами хозяина, облегчают репликацию вируса. Например, крупные ДНК-содержащие вирусы (герпесвирусы, аденовирусы, поксвирусы) имеют в своем геноме целый ряд генов, которые кодируют белки, используемые вирусами для противодействия иммунным реакциям организма (эти гены были, по-видимому, захвачены вирусами в процессе эволюции и модифицированы в пользу вирусов). Многие вирусы обладают способностью нейтрализовывать активность ряда цитокинов, играющих ключевую роль в развитии противовирусного иммунного ответа (ИФН, ФНО, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4), и тем самым - вызывать в организме иммуносупрессию. Использование фоспренила в профилактических и лечебных целях при вирусных инфекциях позволяет, на наш взгляд, предотвращать развитие вирусиндуцированной иммуносупрессии.

Следует особо подчеркнуть, что успешное применение ФП (как и других иммуномодуляторов) зависит от целого ряда важных обстоятельств. Во-первых, от особенностей патогенеза той или иной вирусной инфекции. Роль клеточного и гуморального иммунитета, специфические формы взаимодействия вируса с клетками иммунной системы (как и с основными клетками-мишенями для вируса) при многих вирусных инфекциях остаются неизученными. Во-вторых, механизмы иммуномодулирующего действия фоспренила (учитывая широкий спектр биологической активности препарата) также находятся в процессе изучения.
Но даже в тех случаях, когда патогенез вирусных инфекций изучен достаточно детально (например, динамика размножения вируса в клетках-мишенях, особенности иммунного ответа, динамика появления противовирусных антител, в частности - IgM, IgG, IgA - в крови больных животных) и, казалось бы, можно смело
рекомендовать применение тех или иных иммуномодуляторов в зависимости от направленности их действия на иммунную систему организма-хозяина, тем не менее, применять их необходимо с определенной осторожностью. В этом случае фоспренил не является исключением из правила. Например, авторитетный специалист в области инфекционных болезней животных П.Е.Игнатов, исходя из знаний особенностей патогенеза ряда вирусных инфекций собак, дает обоснованные рекомендации по применению иммуномодуляторов, оптимальных для каждой из вирусных инфекций. Так, при парвовирусном энтерите – комплексные препараты, стимулирующие фагоциты (особенно печени) и В-систему, при аденовирусном гепатите и ларинготрахеите предпочтительно применение стимуляторов фагоцитов, а при чуме плотоядных в основном рекомендуется применение стимуляторов В-системы, а лечение стимуляторами системы Т-хелперов и макрофагов эффективно лишь на ранних стадиях развития инфекции. Фоспренил определенно относится к комплексным иммуномодуляторам, поэтому следовало бы ожидать наибольшего успеха при лечении с его помощью парвовирусного энтерита собак или панлейкопении кошек (также вызываемой парвовирусом). И, в свою очередь - значительно меньшего эффекта при лечении чумы плотоядных. Однако широкая практика применения фоспренила в качестве средства этиотропной терапии вирусных инфекций собак и кошек показала, что наилучший результат лечения достигается как раз при чуме плотоядных у собак. При этом фоспренил успешно используется как на ранних, так и на более поздних сроках развития инфекции, причем при различных формах заболевания (даже при нервной форме чумы) у собак различных пород и возрастов (Деева А.В. и соавт., 1998). Лечение фоспренилом парвовирусного энтерита собак и панлейкопении кошек оказывается значительно менее эффективно. Аналогичная картина наблюдается при лечении фоспренилом инфекционного гепатита и ларинготрахеита собак, вызываемых аденовирусами.

Почему это происходит? Прежде всего, это можно объяснить особенностями патогенеза каждой вирусной инфекции. Так, парвовирусный энтерит характеризуется быстрым течением инфекции: максимальные титры вируса в крови и фекалиях обнаруживаются уже на 3-4-е сутки после инфицирования, а противовирусные антитела - лишь на 5-7-е сутки. При этом задолго до того, как успевает сформироваться адекватный иммунный ответ, у больного животного оказываются пораженными вирусом жизненно важные органы: обширно поражаются уже на 2-й день после экспериментального заражения лимфоузлы, тимус, селезенка, тонкий отдел кишечника. Поэтому лечебный иммуномодулирующий эффект фоспренила (как и многих других препаратов, за исключением специфических сывороток) может попросту не успеть вовремя реализоваться. Иная картина наблюдается при инфицировании организма вирусом чумы плотоядных. Развитие специфического иммунного ответа регистрируется уже на 3-5-е сутки, при этом стимулируется Т- и В-система иммунитета. Течение этой инфекции характеризуется интенсивным размножением вируса в макрофагах, Т- и В-лимфоцитах и, как следствие этого – развитие в организме больного животного иммуносупрессии. В этой связи успешное лечение фоспренилом чумы плотоядных может объясняться предотвращением развития вирусиндуцированной иммуносупрессии или ее коррекцией при применении препарата. Другим важным обстоятельством является тот факт, что фоспренил наряду с иммуномодулирующей активностью (ряд особенностей которой до сих пор интенсивно изучаются) обладает прямым противовирусным действием и эффект этого действия зависит от строения вируса. В наших экспериментальных исследованиях было четко показано, что фоспренил значительно подавляет размножение вируса чумы плотоядных в чувствительной культуре клеток СПЭВ и, напротив, не оказывает противовирусного действия in vitro в отношении парвовируса (по данным, полученным специалистами ВГНКИ А.А.Ольшанской и др.) и аденовируса .

Таким образом, логично предположить, что при чуме плотоядных фоспренил действует двояко: с одной стороны как иммуномодулятор, а с другой – как препарат, способный напрямую подавлять размножение вируса в органах и тканях больного животного. Таким комплексным воздействием фоспренила на вирусную инфекцию можно объяснить успехи в лечении чумы плотоядных, и напротив - определенные трудности в лечении инфекций, вызываемых парво- и аденовирусами.

ПРЯМОЕ ПРОТИВОВИРУСНОЕ ДЕЙСТВИЕ ФОСПРЕНИЛА

Под прямым противовирусным действием фоспренила мы понимаем непосредственное нарушение препаратом одной или нескольких основных фаз жизненного цикла вирусов: неспецифическое связывание фоспренила с вирионами вне клетки, препятствие сорбции вируса на клетках (блокирование клеточных рецепторов на мембране), нарушение репликации и сборки вирусных частиц внутри клетки, препятствие выходу вирионов из клетки.
В экспериментальных исследований in vitro нам удалось выявить способность фоспренила подавлять размножение целого ряда ДНК- и РНК-содержащих вирусов, играющих важную роль в патогенезе животных и человека.

В ходе экспериментов мы выявили следующую закономерность: если в культуру клеток сначала вносить необходимое количество ФП (как правило, 200 мкг/мл), затем оставлять клетки контактировать с препаратом в течение разных промежутков времени (1 час, 2 часа, 24 часа или 48 часов), а затем заражать вирусом, то никакой разницы в титрах вируса между контролем и опытом не выявляется. Логично предположить, что препарат не действует на этапе сорбции вируса на клетки и не блокирует специфические для вируса клеточные рецепторы. Противовирусный эффект препарата проявлялся лишь в тех случаях, когда вирус и ФП вносили в культуру одновременно (или предварительно в течение непродолжительного времени 0,5 часа инкубировали вирус с препаратом). Исходя из полученных результатов, нами была выдвинута гипотеза о том, что фоспренил взаимодействует с вирионами вне клетки. Для проверки этой гипотезы мы провели серию экспериментов, используя реакцию прямой гемагглютинации. Эта методика была выбрана нами, исходя из следующих соображений:

Было обнаружено, что фоспренил обладает выраженной дозозависимой гемагглютинирующей активностью в отношении эритроцитов гуся (ЭГ) и не обладает таковой в отношении эритроцитов собаки или кошки. Давно известно, что вирус клещевого энцефалита агглютинирует ЭГ, поэтому реакция торможения гемагглютинации в присутствии противовирусных антител давно используется для определения титров антител к вирусу. В многократно повторенных экспериментах мы показали, что фоспренил блокирует гемагглютинирующую активность вируса (так и наоборот: вирус тормозит гемагглютинацию ЭГ фоспренилом). Полученные данные, на наш взгляд, подтвердили гипотезу о том, что фоспренил может взаимодействовать с вирионами вне клетки, по-видимому, образуя устойчивые комплексы фоспренил-вирус, и тем самым препятствовать заражение чувствительных клеток. Однако этот механизм прямого противовирусного действия фоспренил - не единственный.
Была выявлена и другая закономерность.

Во всех опытах (вне зависимости от того, какой вирус был объектом исследований, и какая культура клеток использовалась для размножения вирусов) проявление цитопатического действия вируса в культуре в присутствии фоспренила всегда регистрировалось на 24-48 часов позднее, чем в контрольных зараженных клетках даже при высоких дозах вируса. Нас заинтересовал вопрос: не изменяет ли препарат вирулентность урожая вируса? Для ответа на этот вопрос мы протитровали урожай вне- и внутриклеточного вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (относится к герпесвирусам): а) контрольный, то есть полученный без внесения фоспренила и б) экспериментальный, полученный на культуре, которую заражали вирусом в присутствии фоспренила на свежей культуре клеток. Оказалось, что титр урожая вируса во всех контрольных пробах значительно выше, чем в таковых, которые заражали вирусом в присутствии препарата. Причем эта разница отчетливо выявлялась как в пробах, исходно зараженных высокими дозами вируса, где первичное проявление ЦПД визуально в световом инвертированном микроскопе выглядело одинаково в контроле и опыте, так и в пробах, инфицированных более низкими дозами. Суммарно титры урожая вируса, полученного в клетках на фоне действия препарата, были на 3-4 lg меньше, чем урожай контрольного вируса. Этот факт свидетельствует о другом механизме прямого противовирусного эффекта препарата. Одним из объяснений этого факта может служить предположение, что на фоне действия фоспренила внутри клетки часть вирионов формируются дефектными (неспособными заражать другие клетки). Частичным подтверждением этого предположения могут быть предварительные данные исследования урожая вируса клещевого энцефалита, полученные методом электронной микроскопии. Так, было установлено, что среди вирусных частиц в урожае (после действия фоспренила)
встречается множество вирионов с разрыхленной оболочкой и без оболочки. Почему же вирионы под воздействием фоспренила формируются дефектными? Точного ответа на этот вопрос пока нет. Однако существуют несколько гипотез, которые в данный момент находятся в стадии экспериментальной проверки.

Другим объяснением существенного снижения вирулентности урожая вируса при воздействии фоспренила является возможная (опосредованная вирусами) стимуляция препаратом интерферона (или других внутриклеточных вирусных ингибиторов). Здесь уместно напомнить данные, приведенные выше: при одновременном введении в организм животного вируса и фоспренила наблюдается значительная стимуляция ИФН. При этом реализация такого механизма противовирусного действия ФП зависит с одной стороны от культуры клеток, а с другой – от структуры и особенностей внутриклеточного цикла размножения вируса. Экспериментальное подтверждение существования такого механизма антивирусного действия ФП смогло бы объяснить некоторые на первый взгляд противоречия, полученные в опытах .

Почему фоспренил в такой разной степени снижает размножение «близкородственных» (принадлежащих к одному и тому же семейству Herрesviridae) вирусов – вируса болезни Ауески в 10 раз, а вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота – более чем в 100 раз? В первом случае титрование вируса проводилось на первичной культуре куриных фибробластов, во втором – на перевиваемой культуре клеток почек теленка (Таурус 1). Если предположить, что фоспренил, внесенный в культуру вместе с вирусом, способен каким-то образом трансформировать клеточный метаболизм и стимулировать синтез интерферона, то разница в степени противовирусной активности ФП в отношении этих вирусов объяснялась бы различной способностью этих культур продуцировать интерферон. Аналогичным образом можно было бы объяснить существенные различия противовирусного действия препарата в отношении других вирусов, полученных на
разных культурах клеток: каждая культура клеток в различной степени способна под влиянием препарата синтезировать интерферон. Здесь необходимо отметить следующий интересный факт: визуально культуры клеток после внесения Фоспренила выглядят несколько иначе, чем контрольные, необработанные препаратом.
Еще одна особенность противовирусной активности препарата на этапах взаимодействия вирус-клетка отчетливо прослеживается в данных, приведенных в Таблице 26: прямое противовирусное действие ФП проявляется только в отношении вирусов, содержащих внешнюю оболочку. Так, нами не было выявлено никакой противовирусной активности ФП в отношении аденовируса крупного рогатого скота (штамм В-10).Однако имеются данные, что фоспренил способен подавлять размножение аденовируса собак 2-го типа in vitro (Danilov L.L., е.а., 1997).

Чем можно объяснить различия в полученных данных? С одной стороны результаты были получены на разных культурах клеток, а это обстоятельство может иметь значение, если подтвердится гипотеза о способности ФП стимулировать интерферон в определенных культурах клеток. С другой стороны, в опытах с аденовирусом крупного рогатого скота мы определяли способность фоспренила предотвращать размножение вируса по проявлению ЦПД в культуре. В экспериментах с аденовирусом собак различия были выявлены по способности вируса образовывать в культуре бляшки, а данный метод включает нанесение на культуру агарового покрытия. Не исключено, что агаровое покрытие увеличило контакт фоспренила с культурой и тем самым усилило его действие. Подобное объяснение косвенно подтверждается данными, полученными в опытах in vivo: оказалось, что если ФП вводить в составе желатиновых капсул (примерным аналогом агара), противовирусное действие препарата значительно увеличивается (Pronin A.V., е.а., 1996).
Данные, приведенные в настоящем разделе, свидетельствуют о способности препарата комплексно действовать против вирусной
инфекции, как на уровне целого организма (иммуномодуляция), так и на уровне взаимодействия вирусов с клетками-мишенями: связываться с вирусами вне клеток, препятствуя сорбции последних на клеточных рецепторах, стимулировать синтез интерферона внутри клеток, не исключено, что фоспренил нарушает сборку вирионов на уровне гликозилирования вирусных белков внутри клетки (прямое противовирусное действие). При этом, в зависимости от конкретной вирусной инфекции, в организме животных Фоспренил может осуществлять защитное действие как оптимальный иммуномодулятор - в случаях инфекций, вызываемых безоболочечными вирусами, а в случаях инфицирования организма вирусами, содержащими внешнюю оболочку – двояко: и как иммуномодулятор, и как препарат прямого противовирусного действия. Какой из этих двух механизмов противовирусного действия ФП оказывается решающим – предстоит выяснить в ходе дальнейших экспериментальных и клинических исследований.

В заключение следует отметить, что препарат, безусловно, не является безразличным для организма: увеличивается нагрузка на сердце, у животных с повышенной склонностью к аллергии иногда могут наблюдаться аллергические реакции. Но поскольку препарат назначается в сочетании с симптоматической терапией, включающей препараты, увеличивающие оксигенацию сердечной мышцы и/или увеличивающие ее кровоснабжение, а также антигистаминные и гепатопротекторные препараты, то вероятность проявления побочных явлений резко снижается. При этом фоспренил является практически безвредным препаратом: острая токсичность (LD50) для мышей и крыс наблюдается лишь при введении препарата в дозе, в 25000 раз превышающей среднюю терапевтическую.

НОВОЕ В ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ СОБАК

В.В.ГОСТЕВА
В настоящее время успешно развиваются и внедряются в ветеринарные клиники ультрасовременные методы терапии домашних животных. Практикующие врачи используют не только последние достижения ветеринарной науки, но и широко применяют такие новейшие методы современной медицины, как лазерная терапия, иммунотерапия, акупунктура и акупрессура и другие.
В то же время спектр диагностических методов, позволяющих быстро и точно поставить диагноз заболевшему животному буквально до последних лет оставался достаточно узким и консервативным.
Традиционно применяли: прямую микроскопию при исследованиях кожных заболеваний (клещи и фитопаразиты кожи), овогельминтоскопические исследования, анализ крови на пироплазмоз и лептоспироз. Также существуют методы иммунодиагностики, позволяющие выявлять вирусные антигены и противовирусные антитела при вирусных заболеваниях собак. Однако с развитием современной науки усовершенствовались и методы диагностики.

МЕТОД ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ

Самый современный - это метод электронной микроскопии, позволяющий наиболее точно идентифицировать вирусный патоген, вызвавший заболевание, на основе его ультраструктурных свойств. Это позволяет быстро и наиболее точно подбирать лекарственные средства и тактику лечения.
Рассмотрим вкратце некоторые особенности морфологии вирусов, вызывающих основные инфекционные заболевания у собак, ведь именно благодаря этим отличительным признакам вирионов оказывается возможной ультраструктурная индикация вирусов, вызвавших заболевание.

ВИРУС ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ

Вирус чумы плотоядных относится к роду морбилливирус семейства парамиксовирусов. Эти крупные вирусы имеют
плейоморфную липидсодержащую оболочку с большими поверхностными отростками. Внутри оболочки заключен спиральный нуклеокапсид, диаметр которого у вируса чумы собак составляет 17-18 нм, а шаг спирали - 5-6 нм. Диаметр самих вирионов варьирует от 115 до 300 нм. Эпизоотии, вызванные вирусом чумы плотоядных, были выявлены в популяциях дельфинов Средиземного (1990 г) и Северного (1988) морей, а также в популяции байкальской нерпы.

ПАРВОВИРУСЫ

Парвовирусы являются одними из самых мелких ДНК-содержащих вирусов животных. Их вирионы имеют диаметр от 18 до 26 нм и состоят только из белка и ДНК. Для ветеринарии имеют значение парвовирусы собак, кошек и два вируса норок (алеутской болезни и энтерита). Парвовирусы способны длительно персистировать в организме. Для собак самыми заразными являются варианты парвовирусов CрV-2 и CрV-2a, наиболее распространенных в мире. С парвовирусной инфекцией связаны два различных заболевания собак: болезнь, напоминающая панлейкопению кошек, и энтерит. Кроме того, парвовирусы вызывают и синдром внезапной смерти маленьких щенков с развитием миокардита и застойной сердечной недостаточности.

АДЕНОВИРУСЫ

Аденовирусы являются этиологическими агентами широко распространенного инфекционного гепатита. По морфологическим параметрам аденовирусы представляют собой довольно крупные (диаметр от 65 до 80 нм) частицы икосаэдрической формы, лишенные липопротеиновой оболочки. Есть сведения, что аденовирусы могут также вызывать синдром внезапной смерти, наступающей вскоре после развития диареи.

РЕОВИРУСЫ

Реовирусы были выделены в последние годы в ряде стран из
собачьих фекалий. В природе реовирусы существуют в первую очередь как кишечные вирусы. Их патогенностью определяется способность вирусных частиц выдерживать химические (кислоты, желчь, пищеварительные ферменты) и иммунологические (секреторные иммуноглобулины А) воздействия желудочно-кишечного тракта. Эти вирусы поистине вездесущи. Они могут поражать любых животных.

РОТАВИРУСЫ

Ротавирусы относятся к агентам, вызывающим у собак кишечные инфекции. Это крупные (диаметр 80-160 нм) РНК-содержащие вирусы, которые имеют липопротеиновую оболочку. На поверхности их оболочки располагаются большие, далеко отстоящие друг от друга гликопротеиновые выступы в форме булав. Свое название коронавирусы получили благодаря сходству этих отростков с corona sрinarum - терновым венцом вокруг головы Христа на средневековых изображениях.
Таким образом, благодаря описанным выше отличительным признакам вирионов, возможно эффективно выполнять ультраструктурную индикацию данных патогенных вирусов с помощью метода электронной микроскопии.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ГАМАВИТА ПРИ ЧУМЕ ПЛОТОЯДНЫХ И ПАРВОВИРУСНОМ ЭНТЕРИТЕ У СОБАК

А.А.АНДРИЕВСКАЯ, О.А НИКИТИН.
(Украина, г.Житомир, ветеринарная клиника "Багира") Препарат гамавит применялся в нашей клинике на животных с диагнозом чума плотоядных в 18 случаях, с диагнозом парвовирусный энтерит – в 14 случаях. Возраст пациентов от 1,5 месяцев до 5 лет при диагнозе чума плотоядных, и от 1,5 месяцев до 8 месяцев при диагнозе парвовирусный энтерит. Диагнозы были
поставлены большей частью на основании клинических признаков, лабораторная диагностика, как правило, не проводилась, в связи с отказом владельцев многих животных оплатить стоимость диагностики. В некоторых случаях гамавит применяли параллельно с фоспренилом по схеме. Дозировали гамавит по весу животного – дозировки составляли от 0,5 до 2 мл для внутримышечного введения, и от 1 до 5 мл для внутривенного введения. Состояние животных при применении гамавита не имело резких колебаний, отмечалась стабильность состояния с отчетливой тенденцией к улучшению. Из 18 животных с диагнозом чума плотоядных погибло 1 животное (как мы полагаем, из-за слишком позднего обращения – собака погибла спустя 2,5 часа после поступления на стационарное лечение), из 14 собак с диагнозом инфекционный энтерит погибла 1 (к концу 1 суток нахождения на стационарном лечении). Применение гамавита при указанных патологиях проводилось в течение 7-12 дней наряду с консервативным лечением. При применении препарата гамавит процент смертности существенно снизился.
Залогом успеха в терапии мелких домашних животных является хорошая медикаментозная база. Не секрет, что наличие в ветеринарных клиниках импортных лечебных средств высокого качества, при грамотном их применении, положительным образом сказывается на эффективности лечения. Но, к сожалению, не каждый владелец животного может себе позволить лечить своего питомца дорогостоящими препаратами.
На протяжении четырех с небольшим лет в нашей клинике стабильно применялись и применяются препараты ЗАО "Микро-плюс" – фоспренил, гамавит (аминовит-GM), а в течение последнего года и максидин. Следует отметить, что при незначительной стоимости этих препаратов мы получаем превосходные результаты в терапии целого ряда заболеваний у собак и кошек.

С учетом фармакодинамики и фармакокинетики названных препаратов, мы применяем их совместно в лечении инфекционных заболеваний (чума плотоядных, аденовирозы, гепатит, парвовирусный энтерит, лептоспироз, панлейкопения и ринотрахеит кошек и др.) в сочетании со специфической антибиотикотерапией и добиваемся положительных результатов.
По нашим наблюдениям, гамавит и максидин хорошо зарекомендовали себя в лечении кожных заболеваний различной этиологии, включая демодекоз, а также в комплексной интенсивной терапии пироплазмоза собак и отравлений животных.
Отдельно следует подчеркнуть, что применение гамавита в реабилитации постоперационных состояний значительно сокращает их срок. В рекомендуемых дозах, гамавит хорошо работает в снятии астматического кашля у кошек, если его применять в течение 7 дней подряд. Также гамавит прекрасно помогает поддерживать организм собак в период интенсивных тренировок – дрессировка, подготовка к различного рода соревнованиям и т.п., и в других стрессовых состояниях.
На ранних стадиях инфекционного ринотрахеита кошек применение максидина как иммуностимулятора оказывает значительно больший позитивный эффект в сравнении с другими отечественными препаратами этой группы. Кроме того, 0,15%-ный раствор максидина (глазные капли) в сочетании с инъекцией пролонгированного амоксициллина дает отличный результат в терапии конъюнктивитов как на ранних, так и на более поздних стадиях развития болезни.

Представленная в настоящем сообщении информация о практических фактах терапевтической эффективности фоспренила, гамавита и максидина является далеко не полной. Мы рассчитываем в ближайшее время более подробно опубликовать наши материалы в практических изданиях по ветеринарии.

КОМПЛЕКСНАЯ ТЕРАПИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ СОБАК И КОШЕК

Постников Е.И.
(Ставропольская ГСХА)
В ветеринарной практике особое место занимают болезни вирусной этиологии. По мнению исследователей, причиной возникновения инфекционных заболеваний чаще являются вирусы, чем бактерии. Они исполняют роль "пускового механизма" в развитии инфекционного процесса. Внедряясь в организм хозяина, они ослабляют резистентность организма и создают условия для проникновения в организм условно-патогенной микрофлоры. Таким образом, чаще всего инфекционные заболевания протекают в виде ассоциированных инфекций, что осложняет их диагностику. Чтобы поставить правильный диагноз, порой недостаточно клинического метода
диагностики. Лабораторная диагностика вирусных заболеваний затруднена, так как в настоящее время очень мало тест-диагностикумов для идентификации того или иного вируса. Часто приходится начинать лечение, не зная точного диагноза. Поэтому будущее за препаратами с широким спектром противовирусной активности.
С этой целью мы использовали фоспренил – препарат, разработанный в ИОХ им.Н.Д.Зелинского РАН и НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи РАМН.
Лечебная эффективность фоспренила в сочетании с симптоматическими препаратами при панлейкопении кошек составила 90%, а при энтерите собак инфекционной этиологии – 100%.
Название болезни        Количество животных        Эффективность лечения
Панлейкопения кошек        10        90%
Энтерит собак        18        100%
Особое внимание уделялось противошоковой терапии (снятию гиповолемического шока). Прежде всего, это снятие интоксикации, улучшение питания тканей, восстановление периферического кровообращения.
Для этого, в первую очередь осуществляли восстановление венозного притока и адекватного кровенаполнения сердца, что достигалось внутривенным введением 20%-ного раствора интралипида при средней скорости инфузии равной 20-30 каплям в минуту.
В период реабилитации давали препараты, поддерживающие работу сердца (сульфокамфокаин), восстанавливающие деятельность ЖКТ (церукал), пробиотики (бифидумбактерин, лактобактерин), препараты, действующие на бактериальную и грибковую микрофлору (интетрикс).
Использование предложенной схемы лечения дало значительное уменьшение летальности и осложнений, а при панлейкопении - недопущение вирусоносительства.
После заболевания наблюдение за животными, лабораторный контроль, проводили в течение 3 месяцев.